水中粪大肠菌群的常见检测方法

水中粪大肠菌群检测通过将污染水样接种入多根试管中进行恒温培养,利用大肠菌群繁殖时使乳糖发酵,并能使乳糖蛋白胨培养液变黄,同时产生气泡的特有现象.

详细介绍

水是人类赖以生存的基础，随着人类社会生产的发展和技术的进步，水质污染现象日趋严重。病原微生物污染是我国水体污染的主要原因之一。污染水体的病原微生物种类繁多，而水中粪大肠菌群是水体粪便污染的指示菌，通过监测该项目可以准确的判断监测水域内污染程度，有效预报和控制流行疾病的发生与传播。
常见的水中粪大肠菌群检测方法如下：
1、多管发酵法
通过将污染水样接种入多根试管中进行恒温培养，利用大肠菌群繁殖时使乳糖发酵，并能使乳糖蛋白胨培养液变黄，同时产生气泡的特有现象，根据不同接种量的发酵管所表现阳性结果的数目，从MPN表中查的相应的MPN指数，计算每升水中粪大肠菌群的*近似值。
2、滤膜法
将水样注入已灭菌的放有孔径为0。45μm滤膜的滤器中，经过抽滤，将细菌截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，经44。5℃温度下进行培养，计数培养基上呈蓝色或蓝绿色的菌落，计算出每升水的粪大肠菌数。
3、纸片法
采用纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过粪大肠菌群在上面的生长、显色来测定的方法，即粪大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落，菌落周围产生黄圈是粪大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。
4、酶底物法
将加入酶底物检测试剂的100ml水样注入51孔或97孔的定量测量盘中进行密封后培养，由于大肠菌群细菌能产生一种β-半乳糖苷酶分解PG使得培养液呈黄色，同时大肠埃希氏菌可以产生葡萄糖醛酸酶分解MUG，培养液将会在波长366nm紫外光下产生荧光反应。通过计算有黄色反应和荧光反应的孔穴数，可对照MPN表查出其代表的粪大肠菌群*可能数。
5、聚合酶链式技术
提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA，利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）和约150BP的UdiA基因（β-D-半乳糖苷酶基因）的DNA片段，分别检测大肠菌群数和大肠杆菌。
6、荧光原位杂交技术
由于粪大肠菌群特异的DNA序列，借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交，将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析，确定菌群数。
目前，大肠菌群检测方法发展很快，已提高到分子生物学水平，使检测更快速、准确。酶底物法以其操作简便、检测周期短，将取代多管发酵法、滤膜法等传统方法，尤其是酶底物法采用密封培养技术，在检测医院污水时可以减少人员接触而降低检测人员的致病风险，因此具有更强的实用价值和应用价值，正是目前水中粪大肠菌群的快速检测标准方法之一。

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水中粪大肠菌群的常见检测方法

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